體外受精的精液處理
男方禁欲5~7天,用手淫法將精液收集于一只無菌、無毒的容器內,待其液化后行常規(guī)檢查,包括精液量、液化時間、精子計數(shù)、活動力、活動率、畸形率及紅白細胞、凝集狀況等。詳略。常用的處理方法如下。
1.“梯度:Percoll'’離心法取90%,45%Pereoll各2ml依次加入一支15ml離心管內(falcon 3029)再加入液化后的精液2ml,注意每層之間的界面要清楚,300g/mirl×20分鐘后,取出底部精子,移入6ml試管(Falcon 2003)內,用10%血清Earle’s培養(yǎng)液2ml混勻,再離心200g/min×10分鐘,棄上清液,再加入10%血清Earle’s培養(yǎng)液,將精子濃度調至10萬~30萬/ml,置5%c02,37℃培養(yǎng)箱內備用。
2.上游法10%血清Earle’s培養(yǎng)液與精液按2:1混勻,離心300g/min×10分鐘,棄上清,沉淀中加入10%血清Earle’s液2~3ml,輕輕混勻,再離心200g/min×10分鐘,棄上清液,另取(Falcon 2003)小試管一支,加入10%血清Earle’s液0.5ml,用Pasteur吸管吸取經洗滌后的精子,緩慢加入試管底部,45。傾斜放置C02培養(yǎng)箱內1小時,使精子獲能上游。收集上層云霧狀含活力的精子0.5~0.8ml,調整精子濃度10萬~30萬/ml后備用。
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