1．準(zhǔn)備各種液體

　　(1)洗滌液2個(gè)30mm培養(yǎng)皿(Falcon 3001)或4個(gè)孔的培養(yǎng)(Nuncon：)，加入0．8～2ml 10％血清Eade’s培養(yǎng)液。

　　(2)受精液(insemination medium，IM) 4孔：Nunclon培養(yǎng)皿中每孔加入0．8ml或制成數(shù)個(gè)10％d的10％血清Earle’s液于(falcon 3002)平皿中微滴，表面用石蠟油覆蓋。

　　(3)生長液(growth medium，GM) 與受精液同樣配制。各種培養(yǎng)液制備完成后，都應(yīng)放入5％c02，370C培養(yǎng)箱內(nèi)平衡，以保證pH及滲透壓穩(wěn)定。

　　2．收集卵母細(xì)胞

　　(1)用10ml試管(Falcon 2001)收集卵細(xì)胞迅速將卵泡液倒入培養(yǎng)皿內(nèi)(I~alcon3003)，置實(shí)體解剖鏡下(15×)，先用肉眼觀察可看到一個(gè)灰色透亮的粘液團(tuán)塊，被稱為卵一冠一丘復(fù)合物(OCCC：)，再在解剖鏡下觀察，確認(rèn)是否有卵母細(xì)胞存在。

　　(2)根據(jù)OCCC的形態(tài)學(xué)如顆粒細(xì)胞大小及分散度等判斷卵細(xì)胞成熟度。

　　O級：無卵丘結(jié)構(gòu)，可見放射冠或第一極體。

　　工級：很薄的卵丘和(或)放射冠圍繞在透明帶周圍，見第一極體

　　Ⅱ級：中等大小的卵丘結(jié)構(gòu)，細(xì)胞松散，放射冠界限清晰。

　�、蠹墸郝亚鸾Y(jié)構(gòu)大而松散，放射冠薄分界不清。

　　(3)將收集到的卵一冠一丘復(fù)合體OCCC放入洗滌液內(nèi)，沖洗兩次，去除周圍的紅細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移至IM液中，置5％C02及370C培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)4～6小時(shí)，使卵母細(xì)胞進(jìn)一步成熟。